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内容简介:
分子***技术30多年来一直是 生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版社出版的《分子***实验指南》一书拥有的可靠性和**性,使本书成为业内***、**影响力的实验室操作指南。《BR》第四版的《分子***实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性,10个原有的核心章节经过 新,反映了标准技术的发展和创新,并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节,以突出现有的核酸制备和***、基因转移及表达分析的策略和方法,并增加了12个新章节,专门介绍 激动人心的研究策略,包括利用DNA甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术,以及如何处理数据生成和分析的生物信息学,例如介绍了分析工具的使用,如何比较基因和蛋白质的序列,鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了 的附录,包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。
书籍目录:
上册
第1章 DNA的分离及定量
导言
方案1 SDS碱裂解法制备质粒DNA:少量制备
方案2 SDS碱裂解法制备质粒DNA:大量制各
方案3 从革兰氏阴性菌(如E.coli)中分离DNA
方案4 乙醇法沉淀DNA
方案5 异丙醇法沉淀DNA
方案6 用微量浓缩机进行核酸的浓缩和脱盐
方案7 丁醇抽提法浓缩核酸
方案8 聚乙二醇沉淀法制备M13噬菌体单链DNA
方案9 M13噬菌体铺平板
方案10 M13噬菌体液体培养
方案11 M13噬菌体双链(复制型)DNA的制备
方案12 利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA
方案13 用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
方案14 一步法同时提取细胞或组织中的DNA、RNA和蛋白质
方案15 从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA
替代方案:不使用有机溶剂从鼠尾分离DNA
替代方案:一管法从鼠尾中分离DNA
方案16 快速分离酵母DNA
方案17 微型凝胶电泳后使用溴化乙锭(EB)估算条带中DNA数量
方案18 利用Hoechst 33258通过荧光分析仪估算DNA浓度
方案19 用PicoGreen定量溶液中的DNA
信息栏
第2章 DNA分析
导言
方案1 琼脂糖凝胶电泳
方案2 琼脂糖凝胶中DNA的染色检测
方案3 聚丙烯酰胺凝胶电泳
方案4 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测
方案5 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测
方案6 碱性琼脂糖凝胶电泳
附加方案:碱性琼脂糖凝胶的放射自显影
方案7 成像:放射自显影和感光成像
方案8 用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA
方案9 低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收:有机溶剂抽提法
方案10 聚丙烯酰胺凝胶中DN 段的回收:压碎与浸泡法
方案11 Southern印迹
方案12 Southern印迹:DNA从一块琼脂糖凝胶同时向两张膜转移
方案13 采用放射性标记探针对固定在膜上的核酸DNA进行Southern杂交
附加方案:从膜上洗脱探针
信息栏
第3章 质粒载体***与转化
导言
方案1 制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法:高效转化策略
方案2 制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法:“ 感受态”细胞
方案3 大肠杆菌的简单转化:纳米颗粒介导的转化
替代方案:一步法制备感受态大肠杆菌:在同一溶液中转化和储存细菌细胞
方案4 电穿孔法转化大肠杆菌
方案5 质粒载体***:定向***
方案6 质粒载体***:平末端***
方案7 质粒DNA的去磷酸化
方案8 向平末端DNA添加磷酸化衔接子/接头
方案9 ***PCR产物:向扩增DNA的末端添加限制性酶切位点
方案10 ***PCR产物:平末端***
方案11 ***PCR产物:制备T载体
方案12 ***PCR产物:TA***
方案13 ***PCR产物:TOPO TA***
方案14 使用X-Gal和IPTG筛选细菌菌落α-互补
信息栏
第4章 Gateway重组***
导言
方案1 扩增Gateway载体
方案2 制备可读框入门***和目的***
方案3 应用多位点LR***反应制备目的***
信息栏
第5章 细菌人工染色体及其他高容量载体的应用
导言
方案1 BAC DNA的小量分离和PCR检验
方案2 BAC DNA的大量制备和线性化
方案3 通过脉冲电场凝胶电泳检验:BAC DNA的质量和数量
方案4 两步BAC工程:穿梭载体DNA的制备
方案5 A同源臂(A-Box)和B同源臂(B-Box)的制备
方案6 ***A和B同源臂到穿梭载体
方案7 重组穿梭载体的制备和检验
方案8 通过电穿孔法转化重组穿梭载体到感受态BAC宿主细胞
方案9 共合体的检验和重组BAC***的筛选
……
第6章 真核细胞RNA的提取、纯化和分析
第7章 聚合酶链反应
第8章 生物信息学
中册
第9章 实时荧光聚合酶链反应定量检测DNA及RNA
0章 核酸平台技术
1章 DNA测序
2章 哺乳动物细胞中DNA甲基化分析
3章 标记的DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针的制备
4章 体外诱变方法
5章 向培养的哺乳动物细胞中导入基因
6章 向哺乳动物细胞中导入基因:病毒载体
下册
7章 利用报道基因系统分析基因表达调控
8章 RNA干扰与小RNA分析
9章 ***基因的表达以及目的蛋白的纯化和分析
第20章 利用交联技术分析染色质结构与功能
第21章 紫外交联免疫沉淀(CLIP)技术进行体内RNA结合位点作图
第22章 Gateway相容酵母单杂交和双杂交系统
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书籍真实打分
故事情节:5分
人物塑造:5分
主题深度:8分
文字风格:4分
语言运用:7分
文笔流畅:7分
思想传递:3分
知识深度:9分
知识广度:7分
实用性:6分
章节划分:9分
结构布局:3分
新颖与独特:8分
情感共鸣:5分
引人入胜:7分
现实相关:9分
沉浸感:3分
事实准确性:5分
文化贡献:4分